UBE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402844

Übersicht

UBA1 kodiert das ubiquitinähnliche Modifikator‑aktivierende Enzym 1 (UBE1), die E1‑Ligase, die die ATP‑abhängige Ubiquitinaktivierung einleitet und Ubiquitin an E2‑konjugierende Enzyme überträgt, um die Funktion des Ubiquitin‑Proteasom‑Systems zu ermöglichen. Über diesen vorgeschalteten Kontrollpunkt beeinflusst UBE1 den globalen Proteinumsatz, die Proteostase und Stressantworten und wirkt sich damit auf Prozesse wie Zellzyklusprogression, DNA‑Schadenssignalgebung und die Regulation angeborener Immunwege aus. Eine Störung der UBA1‑Aktivität kann ubiquitinabhängige Signalnetzwerke umgestalten und die Stabilität zentraler Regulationsproteine verändern, was sie relevant für Studien zu Neurodegeneration, krebsassoziierten Proteostase‑Abhängigkeiten und X‑chromosomalen Erkrankungen einschließlich spinaler Muskelatrophie macht. Da UBE1 an der Spitze der Ubiquitinierungskaskade steht, bietet eine genetische Inaktivierung einen direkten Ansatz, um den Beitrag des Ubiquitinwegs zur zellulären Homöostase zu untersuchen.

Das UBE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UBA1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UBA1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UBA1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UBE1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UBA1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UBE1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UBA1-Exone abzielen, die für die UBE1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UBA1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UBE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom UBE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UBA1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UBE1 HDR-Plasmid (h) und UBE1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UBA1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UBA1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.