U2AF65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423572

概要

U2af2 は、U2 補助因子（U2AF）の必須RNA結合成分である U2AF65 をコードしており、3′スプライス部位のポリピリミジントラクトを認識し、U2AF35 と協調してスプライソソームの初期アセンブリ時に U2 snRNP をリクルートします。スプライス部位の選択をエクソン定義と結び付けることで、U2AF65 は細胞周期の進行、分化、ストレス応答を制御するグローバルな選択的スプライシングプログラムの形成に寄与します。U2AF65 依存的なスプライシングの攪乱は、DNA損傷応答やアポトーシスを制御する経路におけるアイソフォームのバランスを変化させ得るため、U2af2 はRNAプロセシングに駆動される表現型を解析するうえで有用な結節点となります。スプライス部位認識の異常や U2AF 複合体活性の変化は、発生異常やがんに関連したトランスクリプトーム再編の基盤となる機構に広く関与します。

U2AF65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるU2af2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、U2af2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、U2af2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、U2AF65タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、U2AF65シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、U2af2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• U2AF65の機能に不可欠なU2af2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、U2af2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• U2AF65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびU2AF65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、U2af2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  U2AF65 HDRプラスミド（m）および U2AF65 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはU2af2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のU2af2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。