Tyk 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400902-ACT

O TYK2 humano codifica a tirosina quinase não receptora Tyk2, um membro da família de quinases Janus que acopla receptores de interferon do tipo I e do tipo III e múltiplos receptores de interleucinas à fosforilação de STAT a jusante e a programas transcricionais. A sinalização dependente de Tyk2 modula respostas imunes inatas e adaptativas, moldando a produção de citocinas, a apresentação de antígenos e a expressão de genes inflamatórios por meio da via JAK–STAT. Perturbações genéticas e funcionais em TYK2 estão associadas à desregulação imune, com relevância para a suscetibilidade a infecções, fenótipos inflamatórios crônicos e estados de sinalização associados à autoimunidade. Como nó de via, TYK2 é amplamente estudado por seu papel na comunicação cruzada entre receptores de citocinas e no controle dependente do contexto de redes de genes estimulados por interferon.

Tyk 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TYK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tyk 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TYK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TYK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tyk 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TYK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tyk 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tyk 2 em células tumorais com expressão de TYK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.