Plasmide CRISPR d'Activation (h) TXA2R: sc-402468-ACT

TBXA2R code le récepteur humain du thromboxane A2 (TXA2R), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie au thromboxane A2 pour réguler l’activation plaquettaire, la contraction du muscle lisse vasculaire et la signalisation inflammatoire. Après liaison du ligand, TXA2R se couple principalement aux voies Gq/11 et G12/13, favorisant l’activation de la phospholipase C, la mobilisation du calcium intracellulaire, la signalisation via RhoA et des réponses MAPK en aval qui influencent les changements de forme cellulaire, la sécrétion et l’adhésion. Ce récepteur fait le lien entre le métabolisme des eicosanoïdes et l’homéostasie hémostatique et vasculaire, et il est fréquemment étudié dans les contextes de la biologie de la thrombose, de la vasoréactivité et des microenvironnements inflammatoires. Une altération de la signalisation de TXA2R a été associée à une dérégulation de la fonction plaquettaire et à des mécanismes de pathologies vasculaires, ce qui soutient sa pertinence dans des modèles de recherche sur les maladies cardiométaboliques et immuno-associées.

TXA2R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TBXA2R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TXA2R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TBXA2R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TBXA2R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TXA2R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TBXA2R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TXA2R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TXA2R dans les cellules tumorales présentant une expression de TBXA2R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.