Plasmide Double Nickase (h) TWIK-1: sc-405238-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TWIK-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TWIK-1 Double Nickase (h) et le plasmide TWIK-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KCNK1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TWIK-1 Antibody (4D7): sc-517040
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TWIK-1 | sc-405238-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TWIK-1 | sc-405238-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNK1 code pour TWIK-1, un canal potassique (K2P) à deux domaines poreux qui assure une conductance de fond au K⁺ et contribue à déterminer le potentiel de repos de la membrane ainsi que la résistance d’entrée dans les cellules excitables et non excitables. L’activité de TWIK-1 participe à l’homéostasie électrique cellulaire et influence l’excitabilité membranaire, le transport couplé aux ions et les réponses aux variations du pH extracellulaire et de la composition ionique. Dans les tissus humains, TWIK-1 est étudié dans le contexte de la signalisation neuronale, de la physiologie des astrocytes et de la fonction vasculaire, où des altérations de l’activité des canaux potassiques peuvent moduler l’excitabilité des réseaux et les propriétés de barrière. La dérégulation de la fonction des canaux K2P, y compris des mécanismes liés à TWIK-1, est fréquemment étudiée pour ses rôles potentiels dans des phénotypes pertinents pour les maladies neurologiques et cardiovasculaires.
TWIK-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNK1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.