TWEAK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423449

Descripción general

El gen murino **Tnfsf12** codifica **TWEAK** (TNF-like weak inducer of apoptosis), una citocina transmembrana de tipo II de la superfamilia TNF que puede liberarse como ligando soluble y señaliza principalmente a través del receptor **FN14/Tnfrsf12a**. La interacción **TWEAK–FN14** regula programas génicos inflamatorios y la remodelación tisular al activar las vías **NF-κB** canónica y no canónica, y al modular la señalización **MAPK**, influyendo en la supervivencia celular, la apoptosis, la proliferación, la migración y las respuestas angiogénicas. En el ratón, este eje está implicado en las interacciones entre células inmunitarias y estroma y en las respuestas a la lesión, y se estudia con frecuencia en contextos de inflamación crónica, fibrosis, neuroinflamación y remodelación del microambiente tumoral. Dado que TWEAK integra la señalización de citocinas con procesos de reparación, constituye un nodo útil para analizar el diálogo cruzado entre mediadores inflamatorios y la dinámica de la matriz extracelular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TWEAK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnfsf12 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnfsf12 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnfsf12 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TWEAK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnfsf12 para la investigación de la señalización de TWEAK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnfsf12 críticos para la función de TWEAK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnfsf12 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TWEAK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TWEAK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnfsf12. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TWEAK (m) y el plásmido HDR TWEAK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnfsf12 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnfsf12 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.