Plásmido Doble Nickase (h) TRPC6: sc-401205-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TRPC6 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TRPC6 (h) y el plásmido de doble nickasa TRPC6 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TRPC6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TRPC6 Anticuerpo (B-10): sc-515837
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TRPC6 | sc-401205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TRPC6 | sc-401205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRPC6 codifica un canal TRP no selectivo permeable al calcio, que se activa aguas abajo de la señalización de Gq/PLC y del diacilglicerol, conectando la estimulación de receptores con la despolarización de la membrana y la dinámica intracelular de Ca2+. La entrada de Ca2+ mediada por TRPC6 regula la remodelación del citoesqueleto, la contractilidad y programas de transcripción a través de vías que incluyen calcineurina–NFAT y otros efectores sensibles al calcio, con funciones destacadas en podocitos y células de músculo liso vascular. La actividad desregulada de TRPC6 y los cambios en la expresión del canal se asocian con enfermedad renal proteinúrica, incluida la glomeruloesclerosis focal y segmentaria (GEFS) familiar y esporádica, y se han estudiado en contextos de fibrosis renal y remodelado vascular.
TRPC6 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TRPC6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TRPC6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TRPC6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TRPC6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.