Troponin T-SS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423460

Descripción general

Tnnt1 codifica la troponina T del músculo esquelético lento (Troponina T-SS), un componente central del complejo de troponina del filamento delgado que acopla la unión de Ca²⁺ por la troponina C con el movimiento de la tropomiosina y el ciclo de puentes cruzados actina–miosina. Al regular la cinética de contracción del sarcómero y la sensibilidad al Ca²⁺, la Troponina T-SS ayuda a definir la función de las fibras de contracción lenta y contribuye al desarrollo muscular y a la remodelación adaptativa. La expresión o la secuencia alteradas de TNNT1 se asocian con miopatías hereditarias y disfunción contráctil, por lo que resulta relevante para estudios sobre la integridad sarcomérica, el acoplamiento excitación–contracción y la especificación del tipo de fibra. En sistemas murinos, la alteración de Tnnt1 permite la investigación mecanística de fenotipos de debilidad muscular y de las respuestas transcripcionales y proteostáticas posteriores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Troponin T-SS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnnt1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnnt1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnnt1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Troponin T-SS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnnt1 para la investigación de la señalización de Troponin T-SS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnnt1 críticos para la función de Troponin T-SS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnnt1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Troponin T-SS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Troponin T-SS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnnt1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Troponin T-SS (m) y el plásmido HDR Troponin T-SS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnnt1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnnt1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.