Troponin T-C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400949

Descripción general

TNNT2 codifica la troponina T cardíaca, un componente central del complejo de troponina que acopla la señalización de Ca²⁺ con la regulación del filamento delgado de la interacción actina–miosina en el músculo estriado. Al anclar el complejo de troponina a la tropomiosina, TNNT2 ayuda a coordinar la dinámica de contracción del sarcómero, la organización miofibrilar y el acoplamiento excitación–contracción dentro de los cardiomiocitos. La variación genética o la expresión desregulada de TNNT2 se asocia con cardiomiopatías hereditarias y disfunción contráctil, lo que lo convierte en un punto de entrada molecular clave para estudiar la biología sarcomérica, las redes de manejo del calcio y las vías de respuesta al estrés en células cardíacas humanas. Por ello, TNNT2 se utiliza ampliamente como nodo funcional para modelar la remodelación asociada a enfermedad, evaluar la sensibilidad de los miofilamentos y establecer referencias de maduración de cardiomiocitos in vitro.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Troponin T-C (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TNNT2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TNNT2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TNNT2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Troponin T-C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TNNT2 para la investigación de la señalización de Troponin T-C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TNNT2 críticos para la función de Troponin T-C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TNNT2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Troponin T-C CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Troponin T-C CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TNNT2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Troponin T-C (h) y el plásmido HDR Troponin T-C (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TNNT2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TNNT2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.