Troponin I-SS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423457

Descripción general

Tnni1 codifica la isoforma del músculo esquelético lento de la troponina I (Troponina I-SS), una subunidad inhibidora del complejo de la troponina que regula la interacción actina–miosina de manera dependiente de Ca²⁺. Al modular la respuesta del filamento fino al Ca²⁺ mediante interacciones con la troponina C, la troponina T y la tropomiosina, la Troponina I-SS contribuye a definir la cinética de contracción y las propiedades de relajación en fibras oxidativas de contracción lenta. La expresión de Tnni1 y el cambio entre isoformas están estrechamente vinculados a la maduración de las miofibras, la actividad neuromuscular y las vías de adaptación metabólica que determinan el rendimiento muscular y la resistencia. La desregulación de la composición del complejo de la troponina y del manejo sarcomérico del Ca²⁺ es relevante para estudios sobre debilidad muscular, miopatías y remodelación durante el envejecimiento o el desuso, donde una regulación contráctil alterada contribuye al deterioro funcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Troponin I-SS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnni1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnni1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnni1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Troponin I-SS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnni1 para la investigación de la señalización de Troponin I-SS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnni1 críticos para la función de Troponin I-SS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnni1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Troponin I-SS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Troponin I-SS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnni1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Troponin I-SS (m) y el plásmido HDR Troponin I-SS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnni1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnni1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.