Plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-SS (m): sc-423457

Présentation

Tnni1 code l’isoforme musculaire squelettique lente de la troponine I (Troponin I-SS), une sous-unité inhibitrice du complexe de la troponine qui régule l’interaction actine–myosine de manière dépendante du Ca²⁺. En modulant la sensibilité des filaments fins au Ca²⁺ via des interactions avec la troponine C, la troponine T et la tropomyosine, la Troponin I-SS contribue à définir la cinétique de contraction et les propriétés de relaxation des fibres oxydatives à contraction lente. L’expression de Tnni1 et le changement d’isoforme sont étroitement liés à la maturation des fibres musculaires, à l’activité neuromusculaire et aux voies d’adaptation métabolique qui façonnent la performance musculaire et l’endurance. La dérégulation de la composition du complexe de la troponine et de la gestion sarcomérique du Ca²⁺ est pertinente pour l’étude de la faiblesse musculaire, des myopathies et du remodelage lors du vieillissement ou de la désuétude, où une régulation contractile altérée contribue au déclin fonctionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-SS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnni1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnni1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnni1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Troponin I-SS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnni1 pour l'étude de la signalisation de Troponin I-SS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnni1 essentiels à la fonction de Troponin I-SS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnni1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Troponin I-SS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Troponin I-SS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnni1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Troponin I-SS plasmide HDR (m) et le Troponin I-SS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnni1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnni1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.