Plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin C slow skeletal (m): sc-423431

Présentation

Tnnc1 code la troponine C des muscles squelettiques à contraction lente, une sous-unité régulatrice du complexe de la troponine qui lie le Ca2+ et couple les transitoires de calcium cytosolique au cycle des ponts actine–myosine dans le muscle strié. En subissant des changements de conformation dépendants du Ca2+, TNNC1 module la position de la tropomyosine sur les filaments fins et ajuste la cinétique de contraction, la relaxation et l’efficacité énergétique dans les fibres à contraction lente et dans le cœur. Cette fonction de détection du calcium s’intègre aux voies du couplage excitation–contraction et de l’organisation du sarcomère, reliant la gestion intracellulaire du Ca2+ à la réactivité des myofilaments. La dérégulation de TNNC1 et de la sensibilité au Ca2+ des filaments fins est impliquée dans des cardiomyopathies héréditaires et des dysfonctions contractiles, ce qui étaye son utilisation dans les études de biologie sarcomérique et des mécanismes des maladies musculaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin C slow skeletal (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnnc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnnc1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnnc1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Troponin C slow skeletal.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnnc1 pour l'étude de la signalisation de Troponin C slow skeletal, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnnc1 essentiels à la fonction de Troponin C slow skeletal
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnnc1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Troponin C slow skeletal plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Troponin C slow skeletal plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnnc1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Troponin C slow skeletal plasmide HDR (m) et le Troponin C slow skeletal (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnnc1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnnc1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.