Tropomyosin γ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401764

Descripción general

TPM3 codifica la tropomiosina gamma humana, una proteína de tipo coiled-coil que se une a la actina y que estabiliza la actina filamentosa y regula el acceso de las miosinas y de factores asociados a la actina al citoesqueleto. Al modular la dinámica de los filamentos de actina, TPM3 contribuye a procesos de remodelación del citoesqueleto, como el control de la forma celular, la adhesión, la migración y la función contráctil. Las isoformas de tropomiosina ayudan a especificar poblaciones distintas de filamentos de actina que interactúan con vías de señalización que gobiernan la mecanotransducción y la organización de las fibras de estrés. La expresión alterada de TPM3 o los reordenamientos que involucran a TPM3 se han vinculado con una arquitectura del citoesqueleto desregulada y se han descrito en contextos como eventos de fusión oncogénica y fenotipos neuromusculares, lo que lo hace relevante para investigar mecanismos de enfermedad impulsados por el citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin γ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TPM3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TPM3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TPM3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Tropomyosin γ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TPM3 para la investigación de la señalización de Tropomyosin γ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TPM3 críticos para la función de Tropomyosin γ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TPM3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Tropomyosin γ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Tropomyosin γ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TPM3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Tropomyosin γ (h) y el plásmido HDR Tropomyosin γ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TPM3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TPM3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.