TrkB Double Nickase Plasmid (h): sc-400142-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TrkB Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TrkB Double-Nickase-Plasmid (h) und TrkB Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NTRK2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TrkB: sc-136990
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TrkB Double Nickase Plasmid (h) | sc-400142-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TrkB Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400142-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NTRK2 kodiert die Rezeptor-Tyrosinkinase TrkB, einen hochaffinen Rezeptor für BDNF und NT-4/5, der die neuronale Differenzierung, synaptische Plastizität und das aktivitätsabhängige Überleben reguliert. Die Ligandenbindung löst eine Autophosphorylierung von TrkB aus und aktiviert PI3K–AKT-, RAS–MAPK/ERK- und PLCγ-Signalwege, die Transkriptionsprogramme, Zytoskelett-Umbau und calciumabhängige Prozesse steuern. In der menschlichen Biologie wird eine fehlregulierte TrkB-Signalgebung mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht und zudem in onkogenen Kontexten untersucht, in denen eine veränderte Rezeptoraktivität Proliferation und Migration beeinflussen kann. Als Knotenpunkt, der Neurotrophin-Signale mit Wachstums- und Stressantworten verknüpft, wird TrkB häufig in mechanistischen Studien zur Schaltkreisfunktion, zu Zellschicksalsentscheidungen und zur Signaltransduktion eingesetzt.
TrkB Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NTRK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NTRK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NTRK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NTRK2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.