Plásmido Doble Nickase (h) TrkB: sc-400142-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TrkB consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TrkB (h) y el plásmido de doble nickasa TrkB (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NTRK2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TrkB Anticuerpo (H-8): sc-136990
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TrkB | sc-400142-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TrkB | sc-400142-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NTRK2 codifica la tirosina quinasa receptora TrkB, un receptor de alta afinidad para BDNF y NT‑4/5 que regula la diferenciación neuronal, la plasticidad sináptica y la supervivencia dependiente de la actividad. La unión del ligando induce la autofosforilación de TrkB y activa las vías de señalización PI3K–AKT, RAS–MAPK/ERK y PLCγ para controlar programas transcripcionales, la remodelación del citoesqueleto y procesos dependientes de calcio. En biología humana, la desregulación de la señalización de TrkB se ha implicado en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, y también se estudia en contextos oncogénicos donde la actividad alterada del receptor puede afectar la proliferación y la migración. Como nodo de vía que integra señales de neurotrofinas con respuestas de crecimiento y estrés, TrkB se utiliza ampliamente en estudios mecanísticos de la función de circuitos, decisiones de destino celular y transducción de señales.
TrkB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NTRK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NTRK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NTRK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NTRK2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.