TRIM8 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-429995-LAC

Trim8 codifica a TRIM8, uma ligase E3 de ubiquitina da família TRIM que regula a estabilidade de proteínas e o resultado de vias de sinalização por meio da ubiquitinação, influenciando programas transcricionais ligados à imunidade inata e a respostas ao estresse celular. A TRIM8 modula vias acionadas por citocinas, incluindo a NF-κB e a sinalização associada a interferons, e tem sido implicada no controle, de maneira dependente do contexto, da atividade e da renovação (turnover) de reguladores-chave como p53 e proteínas STAT. Em sistemas murinos, a TRIM8 é estudada por seus papéis no neurodesenvolvimento, na inflamação e na homeostase celular, nos quais alterações de expressão podem remodelar a sinalização imune e redes de controle de crescimento. Essas propriedades tornam Trim8 um nó útil para dissecar a regulação, dependente de ubiquitina, de circuitos de sinalização em modelos relevantes para doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRIM8 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Trim8 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRIM8 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Trim8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TRIM8. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Trim8 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.