TRH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423505

Übersicht

Trh kodiert das Thyreotropin-Releasing-Hormon (TRH), ein hypothalamisches Neuropeptid, das als Präprohormon synthetisiert und anschließend zu bioaktivem TRH verarbeitet wird. Dieses signalisiert über TRH-Rezeptoren und reguliert die Hypothalamus–Hypophysen–Schilddrüsen-Achse. TRH integriert die neuroendokrine Kontrolle der hypophysären Thyreotropin-(TSH)-Freisetzung und beeinflusst darüber hinaus weitere homöostatische Prozesse, darunter Energiebilanz, Thermoregulation und neurobehaviorale Schaltkreise. Im ZNS stehen TRH-erge Neurone in Verbindung mit Neurotransmittersystemen und stressresponsiven Signalwegen und koppeln so Peptidsignale an neuronale Erregbarkeit und endokrine Rückkopplung. Eine Fehlregulation der TRH-Signalgebung wurde mit Veränderungen der Schilddrüsenhormonhomöostase sowie mit Phänotypen in Zusammenhang gebracht, die für metabolische und neuroendokrine Erkrankungen relevant sind, wodurch Trh ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in Mausmodellen darstellt.

Das TRH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trh-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trh-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trh nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trh-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trh-Exone abzielen, die für die TRH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trh-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TRH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trh-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRH HDR-Plasmid (m) und TRH HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trh-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trh-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.