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TRB-3慢病毒激活颗粒(h) | sc-401746-LAC | 200 µl | $455.00 |
TRIB3 编码 tribbles 假激酶 3(TRB-3),这是一种催化不活性的类激酶衔接/适配蛋白,可通过搭建蛋白–蛋白相互作用的“支架”来调控信号转导。TRB-3 最为人所知的功能是通过与 AKT 相互作用对 PI3K/AKT 轴进行负向调控,从而影响胰岛素信号传递、细胞代谢以及应激适应性程序。它还可整合内质网应激反应,并与 MAPK 及 TGF-β/SMAD 相关通路发生交叉,进而塑造细胞存活、分化与炎症信号。TRIB3 表达失衡与代谢异常、心血管与神经退行性过程,以及肿瘤相关表型(如凋亡改变与对治疗应激的耐受)有关,因此是开展通路聚焦机制研究的一个有用关键节点。
TRB-3 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 TRIB3 表达。
TRB-3 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在TRIB3转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性TRB-3表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 TRIB3 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。