TRB-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401746-ACT

TRIB3 (TRB-3) codifica una pseudochinasi cataliticamente inattiva che funge da adattatore sensibile allo stress, regolando l’ampiezza del segnale in molteplici vie di trasduzione. TRB-3 modula l’attività di AKT/PKB e si intreccia con le vie PI3K–AKT, MAPK e con la segnalazione da stress del reticolo endoplasmatico/UPR, influenzando il metabolismo del glucosio, l’omeostasi lipidica, l’autofagia e l’apoptosi. Inducibile in condizioni di deprivazione di nutrienti e di ipossia, TRIB3 integra programmi trascrizionali a valle di ATF4/CHOP e di altri regolatori dello stress, plasmando le decisioni sul destino cellulare. Un’espressione deregolata di TRIB3 è stata associata a disfunzioni metaboliche, infiammazione e contesti di segnalazione legati ai tumori, a supporto di studi meccanicistici in ambito cardiometabolico e nella biologia del cancro.

TRB-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRIB3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TRB-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRIB3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRIB3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TRB-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRIB3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TRB-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TRB-3 nelle cellule tumorali con espressione di TRIB3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.