TRAP95 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405827

Descripción general

MED16 codifica TRAP95, una subunidad esencial del complejo Mediator que conecta factores de transcripción específicos de secuencia con la ARN polimerasa II para coordinar la expresión génica dependiente de estímulos. TRAP95 contribuye a programas de regulación transcripcional vinculados al control del ciclo celular, la diferenciación y la señalización sensible al estrés, lo que refleja su papel en la integración de múltiples vías upstream en promotores y potenciadores. La alteración de la función de Mediator, incluidas las perturbaciones de MED16, se ha asociado con una desregulación transcripcional amplia observada en el cáncer y en otros trastornos de la identidad celular y la homeostasis. Como proteína reguladora nuclear humana, TRAP95 se estudia con frecuencia por su contribución a redes transcripcionales y al control de la expresión génica asociado a la cromatina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRAP95 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MED16 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MED16 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MED16 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRAP95.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MED16 para la investigación de la señalización de TRAP95, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MED16 críticos para la función de TRAP95
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MED16 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRAP95 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TRAP95 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MED16. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRAP95 (h) y el plásmido HDR TRAP95 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MED16 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MED16 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.