TRAP230 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-404820-KO-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TRAP230 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h2) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TRAP230, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TRAP230 Anticuerpo (E-2): sc-515695
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TRAP230 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2) | sc-404820-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
MED12 codifica TRAP230, un componente central del complejo Mediator que conecta factores de transcripción específicos de secuencia con la ARN polimerasa II y coordina el inicio y la elongación de la transcripción. Mediante la regulación dependiente de Mediator, TRAP230 influye en programas génicos del desarrollo y en vías de señalización que incluyen Wnt/β-catenina, TGF-β y la transcripción mediada por receptores nucleares. La alteración de MED12 perturba el control transcripcional asociado a la cromatina, modificando la identidad celular y las redes transcripcionales vinculadas a la proliferación. Las alteraciones genéticas en MED12 se han relacionado con múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que lo convierte en una diana útil para estudiar mecanismos de desregulación transcripcional en células humanas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRAP230 (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MED12 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MED12 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MED12 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRAP230.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MED12 para la investigación de la señalización de TRAP230, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MED12 críticos para la función de TRAP230
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MED12 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TRAP230 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TRAP230 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MED12. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRAP230 (h) y el plásmido HDR TRAP230 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MED12 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MED12 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.