Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRAP220: sc-400855-ACT

MED1 (TRAP220) est une sous-unité centrale du complexe Mediator, qui relie les facteurs de transcription spécifiques de séquence à l’ARN polymérase II, en coordonnant l’initiation et la transcription dépendante des enhancers. En tant que coactivateur des récepteurs nucléaires, TRAP220 intègre des signaux issus des voies hormonales et métaboliques afin de réguler des programmes contrôlant la prolifération, la différenciation et les réponses cellulaires au stress. Le contrôle transcriptionnel dépendant de MED1 s’entrecroise avec le remodelage de la chromatine et la régulation épigénétique, influençant la spécification des lignages et des états transcriptionnels oncogéniques dépendants du contexte. Une activité de MED1 dérégulée et une signalisation Mediator altérée ont été associées à des cancers hormonosensibles ainsi qu’à d’autres troubles impliquant un déséquilibre transcriptionnel et métabolique, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation de la transcription.

TRAP220 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MED1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRAP220 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MED1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MED1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRAP220. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MED1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRAP220 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRAP220 dans les cellules tumorales présentant une expression de MED1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.