Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAP-1 (h): sc-402963

Présentation

TGFBRAP1 code la protéine 1 associée au récepteur du facteur de croissance transformant bêta (transforming growth factor beta receptor–associated protein 1, TRAP-1), un adaptateur cytoplasmique impliqué dans la modulation de la signalisation de la superfamille TGF-β. Il a été rapporté que TRAP-1 s’associe à des composants du complexe récepteur du TGF-β et influence les réponses transcriptionnelles en aval dépendantes des SMAD, lesquelles régulent la prolifération, la différenciation, le remodelage de la matrice extracellulaire et des programmes géniques liés à l’immunité. Par son rôle dans l’orientation de la sortie de la voie et des événements proximaux au récepteur, TGFBRAP1 est étudié dans le contexte des interactions entre voies de signalisation (crosstalk) et des transitions d’état cellulaire. Une régulation altérée de la voie TGF-β est largement pertinente pour la fibrose, la biologie des cancers et les mécanismes des maladies inflammatoires, faisant de TRAP-1 une cible utile pour des études mécanistiques de cette voie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAP-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TGFBRAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TGFBRAP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TGFBRAP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRAP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TGFBRAP1 pour l'étude de la signalisation de TRAP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TGFBRAP1 essentiels à la fonction de TRAP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TGFBRAP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRAP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRAP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TGFBRAP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRAP-1 plasmide HDR (h) et le TRAP-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TGFBRAP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TGFBRAP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.