TPD52 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423477

Descripción general

Tpd52 codifica la proteína tumoral D52 (TPD52), un regulador conservado del tráfico de membranas y de la dinámica de la vía secretora que influye en el transporte vesicular, la exocitosis y la distribución de proteínas en la superficie celular. En células de ratón, la actividad de TPD52 se ha vinculado a procesos que sustentan el crecimiento y la remodelación celulares, incluida la coordinación de compartimentos de membrana intracelulares y de salidas de señalización asociadas a la función de células epiteliales e inmunitarias. Se ha descrito una expresión desregulada de TPD52 en múltiples contextos relacionados con el cáncer, donde las alteraciones del tráfico y la secreción pueden afectar la proliferación, la migración y la adaptación metabólica. Como resultado, Tpd52 se estudia con frecuencia en modelos de biología tumoral y plasticidad del estado celular para definir cómo el transporte de membranas se integra con programas de señalización oncogénica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TPD52 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tpd52 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tpd52 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tpd52 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TPD52.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tpd52 para la investigación de la señalización de TPD52, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tpd52 críticos para la función de TPD52
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tpd52 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TPD52 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TPD52 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tpd52. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TPD52 (m) y el plásmido HDR TPD52 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tpd52 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tpd52 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.