Tom20 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400041-ACT

ヒトTOMM20は、ミトコンドリア外膜トランスロカーゼ（TOM）複合体の中核受容体であるTom20をコードしており、N末端の標的化プレシークエンスを認識して、核コードタンパク質のミトコンドリアへの取り込みを開始します。Tom20はミトコンドリアタンパク質輸送を制御することで、酸化的リン酸化、ミトコンドリア動態、プロテオスタシスを支え、エネルギーストレスに対する細胞応答にも影響を与えます。TOMM20の発現や機能の変化は、ミトコンドリア機能不全や、アポトーシスおよび自然免疫シグナル伝達の攪乱と関連付けられており、がん代謝や神経変性疾患の機序研究において重要です。そのためTOMM20は、ミトコンドリアマーカーとして広く用いられるとともに、オルガネラ生合成と細胞生存経路を結び付ける機能的ノードとして位置付けられています。

Tom20 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TOMM20の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Tom20 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TOMM20 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTOMM20転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Tom20の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTOMM20遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTom20依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTOMM20発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTom20経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。