Tollip CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402638-ACT

Das humane Gen **TOLLIP** kodiert das Toll-interagierende Protein (Tollip), einen endosomalen Adapter, der die angeborene Immun-Signalübertragung nachgeschaltet von Toll-like-Rezeptoren und der IL-1-Rezeptorfamilie moduliert. Tollip bindet ubiquitinierte Fracht und koppelt an die Ubiquitin-Proteasom- sowie die endolysosomale Transportmaschinerie an, um Rezeptorumsatz, Signalstärke und die Expression entzündungsassoziierter Gene zu beeinflussen. Über seine Rolle in der Regulation der TLR/IL-1R–NF-κB- und MAPK-Signalwege trägt **TOLLIP** zu zellulären Entscheidungen bei, die die Zytokinproduktion und die Immuntoleranz prägen. Eine fehlregulierte TOLLIP-Aktivität wurde mit veränderten Entzündungsreaktionen in Verbindung gebracht und in Kontexten wie Infektionsbiologie, chronischer Entzündung und immunvermittelten Krankheitsmechanismen untersucht.

Tollip Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TOLLIP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Tollip Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TOLLIP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TOLLIP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Tollip-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TOLLIP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Tollip-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Tollip-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TOLLIP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.