Plasmide CRISPR/Cas9 KO TOK-1 (h): sc-406452

Présentation

BCCIP (également appelé TOK-1) code une protéine interagissant avec BRCA2 et CDKN1A (p21) qui contribue au maintien du génome en coordonnant les réponses au stress de réplication de l’ADN et la réparation de l’ADN. Il a été impliqué dans des processus associés à la recombinaison homologue, la stabilité des fourches de réplication et le contrôle des points de contrôle, le reliant ainsi à des voies qui préservent l’intégrité chromosomique durant la phase S. Grâce à ses interactions fonctionnelles avec BRCA2 et p21, BCCIP peut influencer la progression du cycle cellulaire et la fidélité de la résolution des dommages à l’ADN. La dérégulation ou la diminution d’activité de BCCIP est fréquemment étudiée dans le contexte de phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie des cancers et d’autres troubles associés à une réparation de l’ADN déficiente.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TOK-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BCCIP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BCCIP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BCCIP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TOK-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BCCIP pour l'étude de la signalisation de TOK-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BCCIP essentiels à la fonction de TOK-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BCCIP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TOK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TOK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BCCIP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TOK-1 plasmide HDR (h) et le TOK-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BCCIP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BCCIP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.