TMPRSS11D CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407568-ACT

TMPRSS11D kodiert eine Typ‑II‑transmembrane Serinprotease, die überwiegend in Epithelgeweben exprimiert wird und dort zur perizellulären Proteolyse an der Zelloberfläche beiträgt. Durch die Spaltung extrazellulärer oder membranassoziierter Substrate kann TMPRSS11D die epitheliale Differenzierung, den Umbau der Barriere sowie proteaseaktivierte Signalwege beeinflussen, die entzündliche Reaktionen und die Gewebehomöostase mitprägen. Eine fehlregulierte Aktivität oder Expression membranverankerter Serinproteasen wurde mit einer veränderten mukosalen Integrität und aberranten Umbauprogrammen in chronischen Erkrankungen der Atemwege und des oberen aerodigestiven Trakts in Verbindung gebracht. TMPRSS11D ist daher ein nützliches Ziel, um die proteaseabhängige Regulation epithelialer Mikroumgebungen und kontextspezifischer Transkriptionsprogramme in humanen Zellen zu untersuchen.

TMPRSS11D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TMPRSS11D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TMPRSS11D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TMPRSS11D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TMPRSS11D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TMPRSS11D-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TMPRSS11D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TMPRSS11D-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TMPRSS11D-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TMPRSS11D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.