Particules Lentivirales d'Activation (h) TMEM97: sc-411997-LAC

TMEM97 code la protéine transmembranaire 97, un composant du complexe du récepteur sigma-2 résidant dans le réticulum endoplasmique, qui module l’homéostasie du cholestérol cellulaire et le trafic des lipides. TMEM97 a été associé à la régulation de la captation des lipoprotéines de basse densité (LDL) via des interactions avec des récepteurs des lipoprotéines, ainsi qu’à des processus plus larges d’organisation membranaire qui influencent la signalisation et l’adaptation métabolique. En façonnant la distribution des stérols et la protéostasie dans la voie sécrétoire, TMEM97 peut affecter les réseaux de réponse au stress et le fonctionnement des organites. Des modifications de l’expression de TMEM97 et de la biologie associée au récepteur sigma-2 ont été étudiées dans des contextes incluant la neurodégénérescence, la dérégulation métabolique et des changements d’état cellulaire liés au cancer, ce qui étaye son intérêt en tant que cible mécanistique pour des études de voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales TMEM97 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TMEM97 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM97 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TMEM97, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TMEM97. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TMEM97 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.