Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEM43: sc-402764-ACT

TMEM43 (protéine transmembranaire 43), également connue sous le nom de LUMA, est une protéine de la membrane nucléaire interne qui s’associe à la lamina nucléaire et contribue à l’organisation de l’enveloppe nucléaire, à la mécanotransduction et au maintien de l’architecture du noyau. En interagissant avec les lamines et d’autres composants de l’enveloppe, TMEM43 influence le positionnement de la chromatine et des programmes de régulation génique liés à la différenciation cellulaire et aux réponses au stress. Une altération de la fonction de TMEM43 a été associée à des phénotypes cardiaques et neuromusculaires, notamment à la cardiomyopathie arythmogène, soulignant sa pertinence pour l’étude des mécanismes pathologiques liés à l’enveloppe nucléaire. Dans des modèles de cellules humaines, la perturbation de TMEM43 est souvent utilisée pour explorer les liens entre structure nucléaire, contrôle transcriptionnel et stabilité de l’état cellulaire.

TMEM43 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM43 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM43 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM43 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM43, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM43. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM43 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM43 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM43 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM43 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.