Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMC8 (h): sc-406378

Présentation

TMC8 (transmembrane channel-like 8 ; également connu sous le nom d’EVER2) code une protéine membranaire à passages multiples impliquée dans la régulation de la signalisation des kératinocytes et des cellules immunitaires, avec des rôles rapportés dans le contrôle de l’homéostasie intracellulaire du zinc et des réponses transcriptionnelles en aval. Il a été associé à des voies influençant la défense antivirale, la différenciation épidermique et la signalisation inflammatoire, notamment via la modulation, dans certains contextes, de réponses liées à NF-κB. Des perturbations génétiques de TMC8 sont associées à une susceptibilité à l’épidermodysplasie verruciforme et à une altération du contrôle par l’hôte des infections cutanées à papillomavirus humain, ce qui étaye sa pertinence pour la biologie de la barrière cutanée et l’étude des interactions virus–hôte. En tant que facteur associé à la membrane, TMC8 est fréquemment étudié pour comprendre comment une signalisation dépendante des ions s’articule avec l’immunité épithéliale et la persistance des infections virales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMC8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMC8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMC8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMC8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMC8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMC8 pour l'étude de la signalisation de TMC8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMC8 essentiels à la fonction de TMC8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMC8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMC8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMC8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMC8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMC8 plasmide HDR (h) et le TMC8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMC8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMC8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.