TIP30 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406742-ACT

HTATIP2 kodiert TIP30, einen tumorunterdrückerähnlichen Faktor, der an der Regulation der Transkription, der apoptotischen Signalübertragung und der Kontrolle des endozytotischen Traffickings beteiligt ist. TIP30 wird mit der Modulation der EGFR-Internalisierung und der nachgeschalteten Signalwege MAPK/ERK und PI3K/AKT in Verbindung gebracht und beeinflusst dadurch Proliferation, Migration und zelluläre Stressantworten. Eine veränderte TIP30-Expression wurde in mehreren Krebszusammenhängen beschrieben und ist mit Veränderungen des metastatischen Potenzials sowie einer erhöhten Resistenz gegenüber Apoptose assoziiert, was seine breite Relevanz für Studien zu onkogenen Signalnetzwerken unterstreicht. Als Produkt eines menschlichen Gens wird TIP30 zudem eingesetzt, um kontextabhängige Transkriptionsprogramme und Crosstalk zwischen Signalwegen in epithelialen sowie immunzellbasierten Modellsystemen zu untersuchen.

TIP30 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HTATIP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TIP30 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HTATIP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HTATIP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TIP30-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HTATIP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TIP30-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TIP30-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HTATIP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.