Plasmide Double Nickase (h) Tim17B: sc-411441-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Tim17B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Tim17B Double Nickase (h) et le plasmide Tim17B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TIMM17B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Tim17 Antibody (H-1): sc-271152
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Tim17B | sc-411441-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Tim17B | sc-411441-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TIMM17B code pour Tim17B, un composant essentiel de la translocase TIM23 de la membrane mitochondriale interne, qui assure l’import et l’insertion dans les mitochondries de protéines codées par le noyau. En soutenant l’homéostasie des protéines mitochondriales, Tim17B contribue à la capacité de phosphorylation oxydative, au maintien du potentiel de membrane mitochondrial et à la protéostasie au sein de la matrice et de la membrane interne. Une perturbation de la fonction du complexe TIM23 peut dérégler le métabolisme énergétique et activer des voies de signalisation de stress mitochondrial, telles que la réponse aux protéines mitochondriales mal repliées (UPRmt), reliant ainsi la biologie de TIMM17B à des programmes plus larges d’adaptation cellulaire. En tant que facteur d’import mitochondrial, TIMM17B est fréquemment étudié dans des travaux sur la reprogrammation bioénergétique et la dysfonction mitochondriale, pertinentes pour le métabolisme des cellules cancéreuses et les phénotypes de stress mitochondrial associés à la neurodégénérescence.
Tim17B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TIMM17B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TIMM17B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TIMM17B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TIMM17B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.