TIM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423480

Übersicht

Das murine Gen **Tpi1** kodiert die Triosephosphat-Isomerase (TIM), ein zentrales glykolytisches Enzym, das die reversible Umwandlung von Dihydroxyacetonphosphat und Glycerinaldehyd-3-phosphat katalysiert. Durch die Aufrechterhaltung eines effizienten Flusses durch die Glykolyse unterstützt TIM die zelluläre ATP-Produktion, das Redoxgleichgewicht sowie die metabolische Kopplung an Signal- und Stoffwechselwege wie den Pentosephosphatweg und anaplerotische Zuflüsse in den Citratzyklus (TCA-Zyklus). Die Aktivität von Tpi1 ist daher wesentlich für die bioenergetische Homöostase in proliferativen und differenzierten Geweben, und ihre Fehlregulation ist relevant für Studien zu metabolischen Stressantworten, Hypoxieanpassung und glykolyseabhängigen Phänotypen. Eine veränderte Kontrolle der Glykolyse unter Beteiligung von Tpi1 wird zudem häufig in Modellen neurologischer Funktionsstörungen, hämolytischer Pathologien und krebsassoziierter metabolischer Reprogrammierung untersucht.

Das TIM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tpi1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tpi1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tpi1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TIM-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tpi1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TIM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tpi1-Exone abzielen, die für die TIM-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tpi1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TIM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TIM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tpi1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TIM HDR-Plasmid (m) und TIM HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tpi1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tpi1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.