TIM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423480

概要

マウスTpi1は、解糖系の中核酵素であるトリオースリン酸イソメラーゼ（TIM）をコードしており、ジヒドロキシアセトンリン酸とグリセルアルデヒド-3-リン酸の可逆的な相互変換を触媒します。TIMは解糖系のフラックスを効率的に維持することで、細胞内ATP産生、レドックスバランス、さらにペントースリン酸経路やTCA回路へのアナプレロティックな補充入力といった経路との代謝的カップリングを支えます。そのためTpi1活性は、増殖組織および分化組織における生体エネルギー恒常性に不可欠であり、その制御異常は、代謝ストレス応答、低酸素適応、ならびに解糖系依存性の表現型に関する研究で重要な対象となります。Tpi1を介した解糖系制御の変化は、神経機能障害、溶血性病態、がんに伴う代謝リプログラミングのモデルにおいても一般的に検討されています。

TIM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTpi1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tpi1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tpi1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TIMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TIMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tpi1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TIMの機能に不可欠なTpi1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tpi1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TIM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTIM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tpi1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TIM HDRプラスミド（m）および TIM HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTpi1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTpi1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。