Plásmido CRISPR de Activación (h) Tie-2: sc-400295-ACT

TEK codifica el receptor tirosina cinasa endotelial Tie-2, un regulador clave del desarrollo y mantenimiento vascular que integra la señalización de las angiopoyetinas para controlar la supervivencia, la migración y la integridad de la barrera de las células endoteliales. La actividad de Tie-2 coordina las vías PI3K/AKT y MAPK aguas abajo y mantiene un diálogo cruzado con programas angiogénicos impulsados por VEGF para modelar la remodelación de los vasos y su estado de quiescencia. La desregulación de la señalización TEK/Tie-2 se ha asociado con angiogénesis patológica, malformaciones vasculares, disfunción endotelial vinculada a la inflamación y remodelación vascular del microambiente tumoral. Por ello, TEK se estudia ampliamente en biología endotelial, permeabilidad vascular y redes de señalización del estroma relevantes para la investigación cardiovascular y oncológica.

Tie-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TEK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tie-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TEK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TEK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tie-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TEK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tie-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tie-2 en células tumorales con expresión de TEK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.