Plásmido CRISPR de Activación (h) TIA-1: sc-400212-ACT

TIA1 codifica TIA-1, una proteína de unión a ARN que reconoce secuencias ricas en uridina (U) y coordina la regulación génica postranscripcional mediante el empalme alternativo, la estabilización del ARNm y la represión de la traducción. TIA-1 es un componente clave de los gránulos de estrés y vincula las respuestas celulares al estrés con cambios en el destino de los transcritos, influyendo en procesos como la apoptosis, la señalización inmunitaria innata y la expresión de genes inflamatorios. A través de sus funciones en el metabolismo del ARN y en programas de adaptación al estrés, se ha asociado la alteración de la actividad de TIA-1 con vías de citocinas desreguladas y con el procesamiento anómalo del ARN observado en contextos de investigación sobre cáncer y neurodegeneración. Estas funciones hacen de TIA1 un nodo útil para estudiar cómo la señalización por estrés remodela las redes de expresión génica a nivel de ARN.

TIA-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TIA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TIA-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TIA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TIA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TIA-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TIA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TIA-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TIA-1 en células tumorales con expresión de TIA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.