THUMPD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420731

Übersicht

Thumpd3 kodiert THUMPD3, ein THUMP-Domäne enthaltendes Protein, das mit RNA-bindenden Funktionen in Verbindung steht, welche den RNA-Stoffwechsel und die posttranskriptionelle Regulation unterstützen. THUMP-Domänen sind häufig mit Enzymen zur tRNA-/rRNA-Modifikation assoziiert und mit Prozessen verknüpft, die die Ribosomenbiogenese, die Translationsgenauigkeit und zelluläre Stressantworten beeinflussen. In Mausmodellen können Störungen der RNA-Prozessierung und der translationalen Kontrolle Proliferations- und Differenzierungsprogramme beeinflussen, wodurch THUMPD3 für die Untersuchung der Homöostase der Genexpression relevant ist. Veränderte Wege der RNA-Modifikation und -Prozessierung stehen allgemein mit Phänotypen in der Neuroentwicklung, der Stoffwechselregulation und der Krebsbiologie in Zusammenhang und liefern einen mechanistischen Kontext für die Untersuchung THUMPD3-abhängiger Netzwerke.

Das THUMPD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Thumpd3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Thumpd3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Thumpd3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die THUMPD3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Thumpd3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der THUMPD3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Thumpd3-Exone abzielen, die für die THUMPD3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Thumpd3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom THUMPD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom THUMPD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Thumpd3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das THUMPD3 HDR-Plasmid (m) und THUMPD3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Thumpd3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Thumpd3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.