Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (m) Thrombin R: sc-420264-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Thrombin R correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Thrombin R Double Nickase (m) et le plasmide Thrombin R Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant F2r. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Thrombin R Antibody (ATAP2): sc-13503
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Thrombin R | sc-420264-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **F2r** code le récepteur de la thrombine (**PAR1**), un récepteur couplé aux protéines G activé par un clivage protéolytique, qui déclenche une signalisation via les voies **Gq**, **Gi** et **G12/13**. L’activation de PAR1 entraîne l’activation de la phospholipase C et la mobilisation du calcium, un remodelage du cytosquelette dépendant de **RhoA/ROCK**, ainsi que la signalisation **MAPK/ERK**, reliant ainsi la coagulation aux réponses vasculaires et inflammatoires. Dans les cellules endothéliales, les plaquettes et les leucocytes, **F2r** influence la fonction de barrière, l’activation plaquettaire, la production de cytokines et la migration cellulaire. Une signalisation thrombine–PAR1 dérégulée a été impliquée dans des modèles expérimentaux de thrombose, de lésion vasculaire, d’athérosclérose, de fibrose et de neuroinflammation, ce qui fait de **F2r** une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation associée à l’hémostase.
Thrombin R Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus F2r dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de F2r. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de F2r. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de F2r.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.