Plasmide CRISPR d'Activation (h) THOC1: sc-403390-ACT

THOC1 code une sous-unité essentielle du complexe THO/TREX, qui couple la transcription par l’ARN polymérase II au traitement des pré-ARNm et à l’export des ARNm à travers le pore nucléaire. En coordonnant l’assemblage des ribonucléoprotéines messagères (mRNP), THOC1 soutient l’intégrité du transcriptome, limite l’accumulation de R-loops et contribue à la stabilité du génome lors de la réplication ainsi que des réponses aux dommages de l’ADN. La perturbation des composants de THO/TREX a été associée à une instabilité génomique liée à la transcription et à des programmes d’expression altérés, fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans d’autres contextes prolifératifs ou de réponse au stress. THOC1 humain est donc largement utilisé comme point d’entrée mécanistique pour étudier le couplage transcription–export, la surveillance de l’ARN et le traitement des ARN associés à la chromatine.

THOC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de THOC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

THOC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus THOC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription THOC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de THOC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus THOC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de THOC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie THOC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de THOC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.