Plásmido CRISPR de Activación (h) TGase1: sc-401487-ACT

El TGM1 humano codifica la transglutaminasa 1 (TGase1), una enzima dependiente de Ca2+ que cataliza enlaces cruzados ε-(γ-glutamil)lisina entre proteínas estructurales durante la diferenciación terminal de los queratinocitos. TGase1 es un componente central del ensamblaje de la envoltura cornificada epidérmica, integrando señales de los programas de queratinización y formación de la barrera para estabilizar el estrato córneo. Su actividad vincula los cambios dependientes de la diferenciación en la disponibilidad de sustratos con la señalización por calcio y la proteostasis en la epidermis superior. La disfunción de TGM1 se asocia con trastornos hereditarios de la integridad de la barrera cutánea y con una cornificación anómala, lo que la convierte en un marcador útil y un nodo mecanístico para estudiar la diferenciación epidérmica y la biología de la barrera.

TGase1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TGM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TGase1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TGM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TGM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TGase1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TGM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TGase1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TGase1 en células tumorales con expresión de TGM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.