TFPI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423362

Übersicht

Tfpi2 kodiert den Tissue-Factor-Pathway-Inhibitor 2 (TFPI-2), einen sezernierten Serinprotease-Inhibitor vom Kunitz-Typ, der die extrazelluläre Proteolyse moduliert, indem er Proteasen wie Plasmin und trypsinähnliche Enzyme hemmt. In Mausgeweben trägt TFPI-2 zur Regulation des Umsatzes der extrazellulären Matrix, der perizellulären Proteaseaktivität sowie der Zell–Matrix-Interaktionen bei, die Adhäsion, Migration und Gewebeumbau beeinflussen. Indem TFPI-2 proteolytische Kaskaden begrenzt, die mit Gerinnung und Fibrinolyse verknüpft sind, und mit dem durch Matrixmetalloproteinasen getriebenen Remodeling interagiert, unterstützt es die vaskuläre und stromale Homöostase. Eine veränderte TFPI-2-Expression oder -Aktivität wurde mit einer fehlregulierten Matrixdegradation und invasiven zellulären Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Fibrose, Gefäßerkrankungen und die Krebsbiologie relevant sind.

Das TFPI-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tfpi2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tfpi2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tfpi2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TFPI-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tfpi2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TFPI-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tfpi2-Exone abzielen, die für die TFPI-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tfpi2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TFPI-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TFPI-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tfpi2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TFPI-2 HDR-Plasmid (m) und TFPI-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tfpi2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tfpi2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.