Plásmido Doble Nickase (h) TFIIIB90-1: sc-405826-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TFIIIB90-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TFIIIB90-1 (h) y el plásmido de doble nickasa TFIIIB90-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BRF1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TFIIIB90-1/2/3/5 Anticuerpo (A-8): sc-390821
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TFIIIB90-1 | sc-405826-NIC | 20 µg | $410.00 |
BRF1 codifica TFIIIB90-1, una subunidad central del factor de transcripción TFIIIB de la ARN polimerasa III, que coopera con TBP y BDP1 para posicionar a la Pol III en los promotores de genes de ARNt, ARNr 5S y otros loci de ARN pequeños no codificantes. Al controlar el inicio de la transcripción por la Pol III, TFIIIB90-1 influye en la biogénesis de ribosomas, la capacidad de traducción y los programas de crecimiento celular, conectando la detección de nutrientes y la regulación transcripcional sensible al estrés con la proliferación. La producción desregulada de Pol III y la actividad de los componentes de TFIIIB se han asociado con la transformación oncogénica y con alteraciones de la proteostasis en múltiples contextos, lo que convierte a BRF1 en un nodo útil para analizar el control transcripcional de las vías biosintéticas. Los estudios funcionales de BRF1 suelen relacionarse con la regulación de la cromatina en promotores de Pol III, la progresión del ciclo celular y la señalización metabólica que modula el rendimiento transcripcional de la Pol III.
TFIIIB90-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BRF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BRF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BRF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BRF1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.