Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) TFIIH p80: sc-402231-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TFIIH p80 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TFIIH p80 Double Nickase (h) et le plasmide TFIIH p80 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ERCC2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TFIIH p80 Antibody (G-2): sc-271206
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TFIIH p80 | sc-402231-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TFIIH p80 | sc-402231-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC2 code pour l’hélicase humaine TFIIH p80 (XPD), une hélicase de l’ADN 5′–3′ dépendante de l’ATP, qui constitue une sous-unité essentielle du complexe TFIIH. TFIIH coordonne la réparation par excision de nucléotides en déroulant l’ADN endommagé autour de lésions volumineuses, et participe aussi à l’initiation de la transcription par l’ARN polymérase II via l’ouverture du promoteur. L’activité d’ERCC2 relie les voies de maintien de la stabilité du génome à la réparation couplée à la transcription, et des défauts de fonctionnement de TFIIH sont associés à une sensibilité aux UV et à des syndromes de réparation de l’ADN, notamment le xeroderma pigmentosum, le syndrome de Cockayne et la trichothiodystrophie.
TFIIH p80 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERCC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERCC2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERCC2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERCC2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.