Plasmide CRISPR/Cas9 KO TFIIF RAP 74 (h): sc-405237

Présentation

GTF2F1 code la sous-unité de 74 kDa du facteur de transcription IIF (TFIIF), également appelée TFIIF RAP 74, un composant central de la machinerie générale de transcription de l’ARN polymérase II. TFIIF stabilise le complexe de préinitiation avec TFIIB et TFIIE, favorise l’échappement au promoteur et module l’élongation de la transcription, tout en aidant à coordonner la transcription avec la maturation co‑transcriptionnelle de l’ARN. Par ces activités, GTF2F1 contribue au contrôle global de l’expression génique, à la progression du cycle cellulaire et aux réponses au stress de réplication ou de transcription. Une régulation altérée des facteurs généraux de transcription et de la dynamique de l’ARN polymérase II est fréquemment associée à des programmes prolifératifs dérégulés et à une instabilité génomique, ce qui fait de GTF2F1 un nœud utile pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans des phénotypes de maladies liées à la transcription.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TFIIF RAP 74 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GTF2F1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GTF2F1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GTF2F1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TFIIF RAP 74.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GTF2F1 pour l'étude de la signalisation de TFIIF RAP 74, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GTF2F1 essentiels à la fonction de TFIIF RAP 74
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GTF2F1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TFIIF RAP 74 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TFIIF RAP 74 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GTF2F1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TFIIF RAP 74 plasmide HDR (h) et le TFIIF RAP 74 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GTF2F1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GTF2F1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.