TFIIB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401174-ACT

GTF2B codifica o fator de transcrição humano IIB (TFIIB), um componente central do complexo de pré-iniciação da RNA polimerase II, que ajuda a posicionar a Pol II nos promotores e dá suporte à seleção do sítio de início durante a transcrição basal. Ao intermediar interações entre TBP/TFIID, TFIIF e a Pol II, o TFIIB contribui para programas transcricionais regulados que governam o controle do ciclo celular, a diferenciação e a expressão gênica responsiva ao estresse. A perturbação da maquinaria geral de transcrição pode remodelar transcriptomas globais e tem sido associada a estados transcricionais oncogênicos e a alterações na capacidade proliferativa em múltiplos sistemas modelo. Como regulador central do início pela Pol II, o TFIIB é rotineiramente estudado no contexto da arquitetura de promotores, do recrutamento de fatores de transcrição e do controle da expressão gênica dependente de cromatina.

TFIIB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GTF2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TFIIB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GTF2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GTF2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TFIIB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GTF2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TFIIB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TFIIB em células tumorais com expressão de GTF2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.