TETRAN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411436

Übersicht

MFSD10 kodiert TETRAN, ein mehrfach die Membran durchspannendes Protein, dem eine Beteiligung an soluttransportbezogenen Prozessen und der Membranhomöostase zugeschrieben wird, was mit seiner Zugehörigkeit zur Major-Facilitator-Superfamily vereinbar ist. Als mutmaßlicher transporterähnlicher Faktor ist TETRAN für Untersuchungen des endomembranären Transports, der Organellenfunktion und der zellulären metabolischen Anpassung von Interesse, da Veränderungen im Fluss kleiner Moleküle Stresssignalwege und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme modulieren können. Eine veränderte MFSD10-Expression wurde in transkriptomischen Datensätzen in verschiedenen Krankheitskontexten berichtet, was die Untersuchung seines Beitrags zu dysreguliertem Stoffwechsel und Zellzustandsübergängen unterstützt. Die Aufklärung der TETRAN-Funktion kann helfen zu verstehen, wie Membrantransportnetzwerke Proliferations-, Überlebens- und Differenzierungsphänotypen in menschlichen Zellen beeinflussen.

Das TETRAN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MFSD10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MFSD10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MFSD10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TETRAN-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MFSD10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TETRAN-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MFSD10-Exone abzielen, die für die TETRAN-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MFSD10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TETRAN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TETRAN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MFSD10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TETRAN HDR-Plasmid (h) und TETRAN HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MFSD10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MFSD10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.