Partículas Lentivirales de Activación (h2) TET1: sc-400845-LAC-2

La TET1 humana (ten-eleven translocation 1) codifica una dioxigenasa dependiente de Fe(II)/2-oxoglutarato que cataliza la oxidación iterativa de la 5-metilcitosina a 5-hidroximetilcitosina y a otros derivados más oxidados, favoreciendo la desmetilación activa del ADN y la remodelación epigenética. La actividad de TET1 moldea programas transcripcionales mediante la regulación de la metilación de islas CpG, la dinámica de los potenciadores (enhancers) y el estado de la cromatina, en interacción con la reparación del ADN y con el mantenimiento de la integridad del genoma asociado a la replicación. La expresión o función desregulada de TET1 se asocia con paisajes aberrantes de metilación del ADN observados en el cáncer y en contextos del neurodesarrollo y de enfermedades neurodegenerativas, lo que la convierte en un nodo clave en los estudios sobre la estabilidad del epigenoma. La edición genética de TET1 permite desentrañar mecanismos de recambio de la metilación del ADN, redes de especificación de linaje y pluripotencia, y el mapeo funcional de elementos reguladores sensibles a la metilación en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral TET1 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TET1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TET1 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TET1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TET1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TET1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.