Particules Lentivirales d'Activation (h2) TET1: sc-400845-LAC-2

Le gène humain TET1 (ten-eleven translocation 1) code une dioxygénase dépendante du Fe(II) et du 2‑oxoglutarate qui catalyse l’oxydation itérative de la 5‑méthylcytosine en 5‑hydroxyméthylcytosine puis en dérivés davantage oxydés, favorisant la déméthylation active de l’ADN et le remodelage épigénétique. L’activité de TET1 façonne les programmes transcriptionnels en régulant la méthylation des îlots CpG, la dynamique des enhancers et l’état de la chromatine, en interaction avec la réparation de l’ADN et le maintien de l’intégrité du génome associé à la réplication. Une expression ou une fonction dérégulée de TET1 est liée à des paysages de méthylation de l’ADN aberrants observés dans le cancer ainsi que dans des contextes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la stabilité de l’épigénome. L’édition du gène TET1 permet une dissection mécanistique du renouvellement de la méthylation de l’ADN, des réseaux de spécification de lignage et de pluripotence, ainsi que la cartographie fonctionnelle d’éléments régulateurs sensibles à la méthylation dans des modèles de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TET1 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TET1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TET1 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TET1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TET1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TET1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.