Plásmido Doble Nickase (h) TERT: sc-400316-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TERT consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TERT (h) y el plásmido de doble nickasa TERT (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TERT. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TERT Anticuerpo (A-6): sc-393013
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TERT | sc-400316-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TERT | sc-400316-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La TERT humana codifica la subunidad catalítica de transcriptasa inversa de la telomerasa, que alarga las repeticiones de ADN telomérico y contrarresta el acortamiento progresivo de los telómeros durante la replicación del ADN. Mediante la regulación de la longitud telomérica y del “capping” (protección) de los telómeros, TERT favorece la estabilidad cromosómica, la capacidad replicativa y la señalización de los puntos de control de daño en el ADN, conectándose con vías como las respuestas mediadas por ATM/ATR y los programas de senescencia. La actividad alterada de TERT se asocia con trastornos de la biología de los telómeros, inestabilidad genómica y procesos oncogénicos, lo que la convierte en un nodo central para estudiar la inmortalización celular, la senescencia inducida por estrés y la evolución clonal. También se investiga a TERT por funciones no canónicas en la regulación transcripcional y la homeostasis mitocondrial que pueden influir en la proliferación y la tolerancia al estrés.
TERT El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TERT en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TERT. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TERT. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TERT alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.