Plásmido CRISPR de Activación (m) TERT: sc-423341-ACT

El gen Tert del ratón codifica la transcriptasa inversa de la telomerasa (TERT), el núcleo catalítico de la ribonucleoproteína telomerasa que alarga las repeticiones de ADN telomérico para preservar la integridad de los extremos cromosómicos. Al contrarrestar el acortamiento de los telómeros durante la replicación del ADN, TERT favorece la vida replicativa, la estabilidad del genoma y la progresión del ciclo celular, y se relaciona con la señalización de la respuesta al daño del ADN y con los programas de senescencia. La regulación de Tert es fundamental para la homeostasis de las células madre y progenitoras y con frecuencia se altera en contextos caracterizados por disfunción telomérica, incluidos fenotipos de envejecimiento prematuro y modelos de tumorigenesis en los que el mantenimiento de los telómeros influye en la inmortalidad celular. Por ello, la modulación de la expresión de Tert se utiliza para estudiar la biología de los telómeros, el control de la cromatina y de la transcripción en el locus Tert, y la activación de puntos de control inducidos por estrés.

TERT El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Tert sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TERT El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Tert en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Tert, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TERT. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Tert y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TERT en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TERT en células tumorales con expresión de Tert silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.