Plasmide CRISPR d'Activation (h) TERE1: sc-402125-ACT

UBIAD1 code pour la protéine humaine TERE1, une prényltransférase qui relie la voie du mévalonate à l’homéostasie redox intracellulaire via la biosynthèse de la vitamine K2 (ménaquinone-4) et d’autres quinones isoprénoïdes apparentées. En régulant le transport d’électrons dépendant des quinones et les réponses au stress oxydant, UBIAD1 influence la fonction mitochondriale, le métabolisme lipidique et les processus de signalisation associés aux membranes. Une activité altérée d’UBIAD1 a été associée à une dérégulation de la gestion du cholestérol et à des dépôts lipidiques cornéens dans la dystrophie cornéenne de Schnyder, et ses rôles plus larges dans la prolifération cellulaire et l’adaptation au stress en font une cible pertinente pour des études mécanistiques des maladies métaboliques et de la biologie du cancer.

TERE1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UBIAD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TERE1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UBIAD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UBIAD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TERE1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UBIAD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TERE1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TERE1 dans les cellules tumorales présentant une expression de UBIAD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.