TEM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407178

Übersicht

ADGRA2 (TEM5) kodiert einen Adhäsions‑G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor mit einer großen extrazellulären Region, die Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Interaktionen unterstützt und extrazelluläre Signale mit der intrazellulären Signalweiterleitung verknüpft. Als Mitglied der Adhäsions‑GPCR‑Familie ist TEM5 mit Prozessen wie dem Verhalten von Endothelzellen, vaskulärem und geweblichem Remodeling sowie der Regulation der Zytoskelettorganisation über GPCR‑gekoppelte Signalwege verbunden. Eine TEM5‑Expression wurde in Kontexten beschrieben, die für tumorassoziierte Gefäße und stromales Remodeling relevant sind, was TEM5 für Studien zur angiogenen Signalgebung und zur Regulation des Mikromilieus interessant macht. Die funktionelle Aufklärung von ADGRA2 kann helfen zu verstehen, wie Adhäsions‑GPCR‑Signalgebung extrazelluläre Adhäsionsdynamiken mit transkriptionellen und zytoskelettalen Antworten in menschlichen Zellen integriert.

Das TEM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ADGRA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ADGRA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ADGRA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TEM5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ADGRA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TEM5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ADGRA2-Exone abzielen, die für die TEM5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ADGRA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TEM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TEM5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ADGRA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TEM5 HDR-Plasmid (h) und TEM5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ADGRA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ADGRA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.