Plasmide CRISPR/Cas9 KO TDAG8 (h): sc-416613

Présentation

GPR65 code TDAG8, un récepteur couplé aux protéines G sensible aux protons, qui détecte l’acidification extracellulaire et transmet des signaux via la voie AMPc/PKA et des programmes transcriptionnels en aval. TDAG8 est particulièrement exprimé dans les contextes immunitaires et hématopoïétiques, où il module les réponses inflammatoires, la chimiotaxie et la survie cellulaire dans des microenvironnements acides. En reliant le pH extracellulaire à la signalisation des GPCR, TDAG8 influence des voies de réponse au stress et des réseaux de cytokines pertinents pour l’inflammation tissulaire et l’acidose associée aux tumeurs. Une activité altérée de GPR65 a été étudiée en lien avec la dérégulation immunitaire et des phénotypes dictés par le microenvironnement, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique en biologie des GPCR et de la détection du pH.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TDAG8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPR65 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPR65, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPR65 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TDAG8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPR65 pour l'étude de la signalisation de TDAG8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPR65 essentiels à la fonction de TDAG8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPR65 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TDAG8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TDAG8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPR65. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TDAG8 plasmide HDR (h) et le TDAG8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPR65 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPR65 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.